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赛百慷(上海)生物技术股份有限公司
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2019/1/23 11:29:11编辑者:iCell赛百慷人气:146

 细胞介绍

该患者为25岁白人男性,已经用环磷酰胺、争光霉素、阿霉素进行过治疗。

 

细胞特性

1) 来源:肺

2) 形态:上皮细胞样

3) 含量:>1x106 个/mL

4) 污染:支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性

5) 规格:T25瓶或者1mL冻存管包装

 

运输和保存

可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式:

(1)干冰运输,收到后立即转入液氮冻存或直接复苏;

(2)存活细胞,收到后应继续生长,传代达到细胞生长状态良好时,再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

(3)收到细胞后请拍照,3天内如果发现污染,请及时拍照与我们联系。


细胞用途:仅供科研使用。

                       

细胞接收后的处理:

1) 收到细胞后,请检查是否漏液,如果漏液,请拍照片发给我们。

2) 请先在显微镜下确认细胞生长状态,去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。

3) 弃去T25瓶中的培养基,添加6ml新的完全培养基。

4) 如果细胞长满(90%以上)请及时进行细胞传代。

5) 接到细胞次日,请检查细胞是否污染,若发现污染或疑似污染,请及时与我们取得联系。

 

细胞培养步骤

一.培养基及培养冻存条件准备:

1) 准备MEM培养基;优质胎牛血清,10%;双抗,1%。

2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。

3) 冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。

二. 细胞处理:

1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入250px皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。

2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。

对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:

1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。

4. 收到细胞后首次传代推荐将细胞悬液按1:2的比例分到新的含6ml培养基的新皿中或者瓶中,建议冻存一支备用,后续传代根据实际情况按1:2到1:5的比例进行。

3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。

  下面T25瓶为类;

1,细胞冻存时,弃去培养基后,PBS清洗一遍后加入1ml胰酶,细胞变圆脱落后,加入1ml含血清的培养基终止消化,可使用血球计数板计数。

2,4min 1000rpm 离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞,根据细胞数量加入血清和DMSO,轻轻混匀,DMSO终浓度为10%,细胞密度不低于1x10E6/ml,每支冻存管冻存1ml细胞悬液,注意冻存管做好标识。

3,将冻存管置于程序降温盒中,放入-80度冰箱,至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

赛百慷(上海)生物技术股份有限公司主要产品和技术服务:

一、原代细胞服务
       各类模式哺乳动物的多种原代细胞资源;
       多种人源性正常及肿瘤原代细胞资源;
       原代细胞分离和培养相关试剂、kit、培养基添加剂等;
       原代细胞相关技术服务和整体实验外包服务;

二、细胞株/系服务
       细胞株/系培养、增殖、冻存和相关说明书;
       细胞系培养过程的技术指导;
       细胞系培养基、添加剂、血清及相关生长因子、试剂等;

三、iPS细胞
       iPS细胞基础培养(有滋养层or无滋养层在);
       iPS细胞增殖及冷冻保存;
       iPS基础培养技术实习;
       新药及实验仪器上市前评估;

四、技术外包服务:各类细胞生物学实验、分子生物学实验、显微镜拍照服务等

五、其他:根据客户需要定制服务等

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